AGS細(xì)胞常見問題及處理策略

　　AGS細(xì)胞（人胃腺癌細(xì)胞）在培養(yǎng)過程中易出現(xiàn)貼壁性差、污染及異常增殖等問題，需針對性優(yōu)化操作流程與環(huán)境控制，以保障細(xì)胞正常生長與實(shí)驗(yàn)可靠性。

　　一、貼壁性差：優(yōu)化培養(yǎng)條件與操作細(xì)節(jié)

　　培養(yǎng)基與血清適配性

　　確認(rèn)使用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM或RPMI-1640培養(yǎng)基，血清需經(jīng)56℃滅活30分鐘以去除補(bǔ)體干擾。若細(xì)胞仍貼壁不佳，可嘗試添加0.1%ECM膠（如Matrigel）預(yù)涂培養(yǎng)瓶，增強(qiáng)細(xì)胞黏附。

　　避免頻繁更換血清品牌，防止因成分差異導(dǎo)致細(xì)胞適應(yīng)不良。

　　傳代操作規(guī)范

　　消化時(shí)使用0.25%胰酶-EDTA，37℃孵育1-2分鐘，待細(xì)胞變圓后立即終止消化（加入2倍體積培養(yǎng)基），避免過度消化損傷細(xì)胞膜。

　　傳代密度控制在1:3至1:4，過低密度（如<1:6）易導(dǎo)致細(xì)胞接觸抑制失效，貼壁能力下降。

　　培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定

　　維持37℃、5%CO?、飽和濕度條件，避免溫度波動(dòng)（如頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱）或氣體濃度異常（如CO?濃度>6%）影響細(xì)胞代謝。

　　二、污染：嚴(yán)格無菌操作與早期干預(yù)

　　細(xì)菌/真菌污染

　　觀察培養(yǎng)基渾濁度、pH變化（黃色變紫）及細(xì)胞形態(tài)（如顆粒增多、崩解），若懷疑污染，立即丟棄細(xì)胞并底消毒超凈臺（75%酒精擦拭+紫外線照射30分鐘）。

　　培養(yǎng)基中添加1%雙抗（青霉素-鏈霉素）作為預(yù)防，但長期使用可能篩選耐藥菌，建議僅在污染高發(fā)期使用。

　　支原體污染

　　定期檢測（如PCR法或熒光染色法），若陽性則用5-10μg/mLBM-Cyclin處理2-3周，同時(shí)更換所有培養(yǎng)用品（包括培養(yǎng)基、血清、槍頭）。

　　三、異常增殖：控制傳代周期與密度

　　過密生長抑制

　　當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)80%-90%時(shí)及時(shí)傳代，避免接觸抑制失效導(dǎo)致細(xì)胞堆疊、形態(tài)異常（如多核化）。

　　若細(xì)胞已堆疊，可用0.02%EDTA短暫處理（1-2分鐘）分散細(xì)胞團(tuán)，再重新鋪板。

　　遺傳漂變干預(yù)

　　每10-15代凍存一支原始細(xì)胞株，避免長期培養(yǎng)導(dǎo)致基因型漂移（如增殖速度加快、藥物敏感性改變）。

　　若細(xì)胞出現(xiàn)自發(fā)轉(zhuǎn)化（如形成克隆島、接觸抑制消失），建議更換新復(fù)蘇的細(xì)胞株。