大鼠成肌細胞是研究肌肉發育、再生及疾病的重要工具,其選擇與應用需結合實驗目標與細胞特性綜合考量。以下從細胞系選擇、培養技術及研究應用三方面展開說明。
一、細胞系選擇:L6細胞系的優勢
L6細胞系源自大鼠骨骼肌,因其易于培養、遺傳操作簡便,成為肌肉研究領域的經典模型。該細胞系具有以下特點:
分化能力:在低血清條件下可自發分化為多核肌管,模擬肌肉發育過程,適用于研究肌纖維形成機制。
代謝特性:高表達GLUT4葡萄糖轉運蛋白,常用于胰島素敏感性及糖尿病相關研究。
遺傳穩定性:低代次冷凍保存并定期克隆篩選,可維持高融合能力,避免代數增加導致的分化潛力下降。
二、培養技術:關鍵條件與操作規范
培養基配置:推薦使用含10%胎牛血清的高糖DMEM培養基,添加1%青鏈霉素預防污染。
傳代與凍存:細胞融合度達80%-90%時,用0.25%胰蛋白酶消化1-2分鐘,按1:3-1:5比例傳代。凍存時采用90%血清+10%DMSO混合液,程序降溫后轉入液氮保存。
污染防控:嚴格無菌操作,定期檢測支原體,避免細胞老化或污染影響實驗重復性。
三、研究應用:從基礎機制到藥物開發
肌肉發育與再生:通過共培養體系或基因編輯技術,研究成肌細胞與成纖維細胞的相互作用,揭示肌肉修復的分子機制。
疾病模型構建:利用L6細胞構建肌縮、肌營養不良等病理模型,評估藥物對肌纖維縮的抑制效果。
藥物篩選平臺:結合高內涵成像技術,篩選促進肌管形成或抗纖維化的候選化合物,加速新藥研發進程。